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當(dāng)前位置: 首頁 > 細胞株 > L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)

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創(chuàng)e慧谷42號樓B幢401室

產(chǎn)品名稱	L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)
商品貨號	MZ-0573
中文名稱	小鼠淋巴瘤細胞
細胞數(shù)量	1*10^6
組織來源	淋巴瘤；雌性；DBA/2
細胞種屬	小鼠
生長特性	懸浮
細胞污染	HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。
培養(yǎng)基	H-DMEM，90%；FBS，10%；雙抗。
傳代方法	Maintain cultures at a cell concentraion between between 1 X 10(5) and 1 X 10(6) viable cells/ml.
培養(yǎng)條件	Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%。Temperature: 37℃
細胞傳代步驟	如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
復(fù)蘇細胞步驟	將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞凍存步驟	待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；? 1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞凍存	Freeze medium: FBS/NBS, 92%;DMSO, 8%（for reference）Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase
細胞運輸	干冰運輸(2ml凍存管)或活細胞運輸（T25細胞瓶）

序號	文章標(biāo)題	操作
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